上一期我們提到了BioTek的微孔板檢測(cè)技術(shù)針對(duì)食品安全檢測(cè)的方法中ELISA的解決方案，BioTek能夠提供包括低通量和高通量的多種“混搭”選擇，除了喜大普奔的ELISA檢測(cè)之外，微孔板檢測(cè)在食品安全領(lǐng)域還有更多的獨(dú)門秘笈。

NO.2 水產(chǎn)品新鮮度解決方案

水產(chǎn)品（魚、蝦、貝類等）新鮮度是評(píng)價(jià)水產(chǎn)制品質(zhì)量的一個(gè)重要指標(biāo)。例如魚肉的生化變化相當(dāng)復(fù)雜, 僅憑單一指標(biāo)或測(cè)定方法來(lái)確定魚的鮮度有一定的難度。目前測(cè)定魚鮮度的方法有感官評(píng)價(jià)法、微生物學(xué)檢測(cè)法、物理和化學(xué)法及生物傳感器法等。生物傳感器法具有體積小、靈敏度高、檢測(cè)步驟簡(jiǎn)便、快速、可靠等特點(diǎn)，下面我們主要介紹NOVOCIB公司推出的水產(chǎn)品新鮮度檢測(cè)試劑盒法。

那么，生物傳感器法的原理是什么呢？

魚、蝦等生物死亡后，其肌肉中的ATP含量隨之下降，ATP的含量可以代表魚、蝦的新鮮程度，因此生物傳感器法是對(duì)魚蝦肌肉中ATP代謝產(chǎn)物的含量進(jìn)行測(cè)定，這些代謝產(chǎn)物的含量高說(shuō)明新鮮度低。

本方法主要檢測(cè)ATP的三個(gè)主要代謝產(chǎn)物
1，IMP(次黃苷酸)：IMP,

2，Inosine(肌苷): Ino

3，Hypoxanthine （次黃嘌呤）：Hx

ATP代謝示意圖（什么，為什么會(huì)是這三個(gè)代謝產(chǎn)物？趕緊好好復(fù)習(xí)一下生物化學(xué)吧）

對(duì)于以上三個(gè)看不見(jiàn)也摸不著的ATP代謝產(chǎn)物，偉大的生物化學(xué)家們發(fā)明了基于酶學(xué)的底物顯色法從而使用顏色來(lái)“追蹤”這些分子，由于需要檢測(cè)三種代謝產(chǎn)物，因此也需要三種不同的酶及輔因子：

點(diǎn)擊圖片可放大查閱

其中，

酶1：可以將IMP全部轉(zhuǎn)化為NADH

酶2：可以將IMP和Hx全部轉(zhuǎn)化為NADH

酶3：可以將IMP、Hx和Ino全部轉(zhuǎn)化為NADH

通過(guò)340nm吸收光檢測(cè)來(lái)測(cè)定NADH的量

知道了原理后，我們?nèi)绾螠y(cè)定？

簡(jiǎn)而言之，使用該生物傳感器的檢測(cè)方法就包括樣品提取、加樣布板、添加底物、孵育和檢測(cè)這幾個(gè)步驟，完全不需要洗滌哦。布板方式如下：

96孔板布板圖，每塊96孔板可檢測(cè)11種水產(chǎn)樣品，按照?qǐng)D示區(qū)域添加酶混合物即可。

可能忙碌的你會(huì)問(wèn)：又是96孔板添加樣品！如果每天我要測(cè)成千上百條魚的新鮮度，這樣加樣豈不是累煞我也？不用擔(dān)心，BioTek總會(huì)為您提供最貼心的解決方案，您完全可以使用Precision Power XS自動(dòng)化移液工作站來(lái)完成所有的加樣步驟。

Precision Power XS自動(dòng)化移液工作站

PrecisionTM是一款全新的液體處理操作系統(tǒng)?？梢詫?shí)現(xiàn)多種的液體轉(zhuǎn)運(yùn)流程，是替代繁復(fù)手工移液分液的理想產(chǎn)品。

PrecisionTM系統(tǒng)特點(diǎn)
1. 替代手工加樣
2. 可選單道、8道、12道移液以及大體積分液
3. 體積小巧，可置于標(biāo)準(zhǔn)大小的生物安全柜內(nèi)
4. 廣泛兼容試管、96及384孔微孔板
5. 獨(dú)特的***頭拾取技術(shù)
6. 液面感應(yīng)
7. 經(jīng)濟(jì)型高端液體處理系統(tǒng)
8. 使用Precision Power軟件更易于安裝和程序操作
9. 可與自動(dòng)化BioStack儲(chǔ)板器相互整合

加好樣的96孔板送入BioTek具備吸收光檢測(cè)的儀器中讀取340nm的吸收光即可完成測(cè)定（例如Epoch及Epoch2），后續(xù)通過(guò)以下的運(yùn)算公式，可以定量APT的三種代謝產(chǎn)物的百分比含量，而這個(gè)步驟，也可以通過(guò)Gen5的數(shù)據(jù)處理記憶模塊自動(dòng)完成：

水產(chǎn)品新鮮度測(cè)定數(shù)據(jù)處理方法

Epoch系列微孔板分光光度計(jì)

全新的EpochTM 2 微孔板分光光度計(jì)采用光柵式設(shè)計(jì)，溫控范圍寬、震蕩形式多樣，極大的拓展了在生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用范圍，從DNA、RNA和蛋白的定量到長(zhǎng)時(shí)動(dòng)力學(xué)監(jiān)測(cè)均可以勝任。用戶可以通過(guò)Epoch2的超大彩色觸控屏完成程序的編輯和數(shù)據(jù)分析，其Wifi和藍(lán)牙功能也為用戶提供了便捷的人機(jī)交互功能。

Epoch2系統(tǒng)特點(diǎn)
1. 兼容6-384孔微孔板，可選比色杯檢測(cè)模塊
2. 200-999nm全波長(zhǎng)檢測(cè)，無(wú)需更換濾光片
3. 專利的溫控模塊，最高可達(dá)65??C，并可實(shí)現(xiàn)差異控溫
4. 支持線性、軌道及雙軌道震蕩模式
5. BioStackTM和第三方自動(dòng)化設(shè)備兼容
6. 兼容Take3微量樣品檢測(cè)模塊，最低可檢測(cè)2μL的樣品點(diǎn)
7. Gen5觸屏和PC儀器控制及數(shù)據(jù)分析軟件

因此，BioTek提供的水產(chǎn)品新鮮度測(cè)定的解決方案示意圖如下所示：

NO.3 抗氧化能力指數(shù)（ORAC）解決方案

抗氧化能力指數(shù)(Oxygen Radical Absorbance Capacity, ORAC)是一種測(cè)量不同食品抗氧化能力的國(guó)際通用標(biāo)準(zhǔn)單位，即umol TE/100g，以平均總ORAC數(shù)值表示食物的抗氧化能力，檢測(cè)數(shù)值愈高代表其抗氧化能力就愈強(qiáng)?？陀^的評(píng)價(jià)脂溶性物質(zhì)的抗氧化活性，有助于人們有意識(shí)的選擇必要的食品，提高健康水平和生活質(zhì)量。

測(cè)定抗氧化能力指數(shù)的原理又是什么呢？

這個(gè)方法以偶氮類化合物AAPH作為過(guò)氧自由基來(lái)源。Sodium Fluorescein為熒光指示劑，其熒光基團(tuán)會(huì)受到氧自由基的影響而改變熒光能力；維生素E水溶性類似物Trolox為定量標(biāo)準(zhǔn)，繼而通過(guò)熒光微孔板分析儀進(jìn)行分析。該方法廣泛應(yīng)用在糧食生產(chǎn)貯存、進(jìn)出口檢疫、乳品、食用油等領(lǐng)域。

檢測(cè)方法

1、樣本前處理：生鮮等提取物、生育酚陽(yáng)性對(duì)照同熒光素溶液充分混合孵育；

2、AAPH氧自由基供體加入，需使用儀器自動(dòng)進(jìn)樣器，隨后開(kāi)始動(dòng)力學(xué)監(jiān)測(cè),動(dòng)力學(xué)間隔1min，持續(xù)1~2h，37℃恒定溫度。

3、檢測(cè)波長(zhǎng)：485/528nm

4、計(jì)算方法：分別計(jì)算生育酚和樣品的AUC及Net AUC

抗氧化劑作用下的熒光衰退曲線下面積與無(wú)抗氧化劑存在時(shí)自由基作用的熒光衰退曲線下面積之差，即熒光熄滅曲線的延遲部分面積Net AUC為抗氧化劑的保護(hù)面積（圖中斜線面積）。

抗氧化劑的氧自由基清除能力ORAC值，又稱為抗氧化劑的抗氧化能力指數(shù)，是通過(guò)熒光衰退曲線的保護(hù)面積與標(biāo)準(zhǔn)抗氧化物質(zhì)的保護(hù)面積相比得出。

由于該方法需要使用熒光強(qiáng)度動(dòng)力學(xué)讀數(shù)，所以我們推薦使用BioTek的FLx800或Synergy機(jī)器以上的機(jī)器進(jìn)行檢測(cè)，可以為您帶來(lái)最便捷的操作體驗(yàn)。

ORAC檢測(cè)工作流程

使用該方法的注意事項(xiàng)：

1，對(duì)pH值敏感，應(yīng)采用緩沖液體系，保持pH在7左右,

2，對(duì)溫度有要求，動(dòng)力學(xué)需要控制在37攝氏度。

相關(guān)認(rèn)證

目前受大眾引用的食物抗氧化值列表為ORAC-07，出自美國(guó)農(nóng)業(yè)部USDA非美國(guó)食品藥物管理局FDA

參考文獻(xiàn)：Nature Protocols 2, 867 - 870 (2007)
此篇文章中使用儀器即為Synergy系列

NO.4 熒光偏振檢測(cè)解決方案

我們上一期介紹了基于吸收光的ELISA檢測(cè)方法，這里我們想要推薦的是一種基于偏振光的檢測(cè)法——熒光偏振免疫檢測(cè)法，這是一種均相檢測(cè)法，相對(duì)于ELISA而言，無(wú)需多次的清洗步驟，主要原理是熒光標(biāo)記的******在樣品緩沖液中與未熒光標(biāo)記的******對(duì)特異性抗體的競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，分子質(zhì)量越大，分子旋轉(zhuǎn)速度越慢，熒光偏振值越大。特點(diǎn)是靈敏、快速、簡(jiǎn)單且成本低。

熒光偏振檢測(cè)的原理

熒光偏振是Perrin于1926年最初提出的一種熒光檢測(cè)技術(shù)。主要是觀察溶中的熒光分子，偏振光激發(fā)時(shí)，將發(fā)射偏振光，由于熒光分子的旋轉(zhuǎn)，發(fā)射光的水平光強(qiáng)和激發(fā)光的水平光強(qiáng)將會(huì)不同。熒光信號(hào)的偏振和分子旋轉(zhuǎn)速度相關(guān)，旋轉(zhuǎn)速度又受溶液的粘度、絕對(duì)溫度、分子體積和氣體常數(shù)影響。如果保持粘度、溫度恒定，那么旋轉(zhuǎn)速度的變化主要取決于分子體積和分子重量。

光偏振原理示意圖

主要檢測(cè)流程

該方法主要用于檢測(cè)真菌******類

黃曲霉******≥ 10ppb
煙曲霉******≥1ppb
嘔吐******≥1ppb

相應(yīng)認(rèn)證

1. 獲得美國(guó)農(nóng)業(yè)部（USDA）認(rèn)證
2. 美國(guó)谷物檢查、包裝、儲(chǔ)存管理局（GIPSA）的認(rèn)證檢測(cè)方法

應(yīng)用領(lǐng)域
● 糧食生產(chǎn)貯存、進(jìn)出口檢疫、乳品、食用油等

這一期我們?yōu)榇蠹耀I(xiàn)上了水產(chǎn)品新鮮度、ORAC檢測(cè)以及真菌******測(cè)定的微孔板解決方案，其實(shí)隨著微孔板檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，也出現(xiàn)越來(lái)越多的針對(duì)該領(lǐng)域的新方法，比如針對(duì)轉(zhuǎn)基因食品安全性問(wèn)題而開(kāi)發(fā)的ELISA及PCR-ELISA檢測(cè)方法等等，如果您對(duì)以上我們提到的食品安全檢測(cè)感興趣，那就快和我們聯(lián)系吧！