上一期我們提到了BioTek的微孔板檢測技術針對食品安全檢測的方法中ELISA的解決方案，BioTek能夠提供包括低通量和高通量的多種“混搭”選擇，除了喜大普奔的ELISA檢測之外，微孔板檢測在食品安全領域還有更多的獨門秘笈。

NO.2 水產(chǎn)品新鮮度解決方案

水產(chǎn)品（魚、蝦、貝類等）新鮮度是評價水產(chǎn)制品質量的一個重要指標。例如魚肉的生化變化相當復雜, 僅憑單一指標或測定方法來確定魚的鮮度有一定的難度。目前測定魚鮮度的方法有感官評價法、微生物學檢測法、物理和化學法及生物傳感器法等。生物傳感器法具有體積小、靈敏度高、檢測步驟簡便、快速、可靠等特點，下面我們主要介紹NOVOCIB公司推出的水產(chǎn)品新鮮度檢測試劑盒法。

那么，生物傳感器法的原理是什么呢？

魚、蝦等生物死亡后，其肌肉中的ATP含量隨之下降，ATP的含量可以代表魚、蝦的新鮮程度，因此生物傳感器法是對魚蝦肌肉中ATP代謝產(chǎn)物的含量進行測定，這些代謝產(chǎn)物的含量高說明新鮮度低。

2，Inosine(肌苷): Ino

3，Hypoxanthine （次黃嘌呤）：Hx

ATP代謝示意圖（什么，為什么會是這三個代謝產(chǎn)物？趕緊好好復習一下生物化學吧）

對于以上三個看不見也摸不著的ATP代謝產(chǎn)物，偉大的生物化學家們發(fā)明了基于酶學的底物顯色法從而使用顏色來“追蹤”這些分子，由于需要檢測三種代謝產(chǎn)物，因此也需要三種不同的酶及輔因子：

其中，

酶1：可以將IMP全部轉化為NADH

酶2：可以將IMP和Hx全部轉化為NADH

酶3：可以將IMP、Hx和Ino全部轉化為NADH

通過340nm吸收光檢測來測定NADH的量

知道了原理后，我們如何測定？

簡而言之，使用該生物傳感器的檢測方法就包括樣品提取、加樣布板、添加底物、孵育和檢測這幾個步驟，完全不需要洗滌哦。布板方式如下：

可能忙碌的你會問：又是96孔板添加樣品！如果每天我要測成千上百條魚的新鮮度，這樣加樣豈不是累煞我也？不用擔心，BioTek總會為您提供最貼心的解決方案，您完全可以使用Precision Power XS自動化移液工作站來完成所有的加樣步驟。

Precision Power XS自動化移液工作站

PrecisionTM是一款全新的液體處理操作系統(tǒng)。可以實現(xiàn)多種的液體轉運流程，是替代繁復手工移液分液的理想產(chǎn)品。

PrecisionTM系統(tǒng)特點
1. 替代手工加樣
2. 可選單道、8道、12道移液以及大體積分液
3. 體積小巧，可置于標準大小的生物安全柜內
4. 廣泛兼容試管、96及384孔微孔板
5. 獨特的***頭拾取技術
6. 液面感應
7. 經(jīng)濟型高端液體處理系統(tǒng)
8. 使用Precision Power軟件更易于安裝和程序操作
9. 可與自動化BioStack儲板器相互整合

加好樣的96孔板送入BioTek具備吸收光檢測的儀器中讀取340nm的吸收光即可完成測定（例如Epoch及Epoch2），后續(xù)通過以下的運算公式，可以定量APT的三種代謝產(chǎn)物的百分比含量，而這個步驟，也可以通過Gen5的數(shù)據(jù)處理記憶模塊自動完成：

全新的EpochTM 2 微孔板分光光度計采用光柵式設計，溫控范圍寬、震蕩形式多樣，極大的拓展了在生命科學實驗中的應用范圍，從DNA、RNA和蛋白的定量到長時動力學監(jiān)測均可以勝任。用戶可以通過Epoch2的超大彩色觸控屏完成程序的編輯和數(shù)據(jù)分析，其Wifi和藍牙功能也為用戶提供了便捷的人機交互功能。

Epoch2系統(tǒng)特點
1. 兼容6-384孔微孔板，可選比色杯檢測模塊
2. 200-999nm全波長檢測，無需更換濾光片
3. 專利的溫控模塊，最高可達65??C，并可實現(xiàn)差異控溫
4. 支持線性、軌道及雙軌道震蕩模式
5. BioStackTM和第三方自動化設備兼容
6. 兼容Take3微量樣品檢測模塊，最低可檢測2μL的樣品點
7. Gen5觸屏和PC儀器控制及數(shù)據(jù)分析軟件

因此，BioTek提供的水產(chǎn)品新鮮度測定的解決方案示意圖如下所示：

NO.3 抗氧化能力指數(shù)（ORAC）解決方案

抗氧化能力指數(shù)(Oxygen Radical Absorbance Capacity, ORAC)是一種測量不同食品抗氧化能力的國際通用標準單位，即umol TE/100g，以平均總ORAC數(shù)值表示食物的抗氧化能力，檢測數(shù)值愈高代表其抗氧化能力就愈強?？陀^的評價脂溶性物質的抗氧化活性，有助于人們有意識的選擇必要的食品，提高健康水平和生活質量。

測定抗氧化能力指數(shù)的原理又是什么呢？

這個方法以偶氮類化合物AAPH作為過氧自由基來源。Sodium Fluorescein為熒光指示劑，其熒光基團會受到氧自由基的影響而改變熒光能力；維生素E水溶性類似物Trolox為定量標準，繼而通過熒光微孔板分析儀進行分析。該方法廣泛應用在糧食生產(chǎn)貯存、進出口檢疫、乳品、食用油等領域。

檢測方法

1、樣本前處理：生鮮等提取物、生育酚陽性對照同熒光素溶液充分混合孵育；

2、AAPH氧自由基供體加入，需使用儀器自動進樣器，隨后開始動力學監(jiān)測,動力學間隔1min，持續(xù)1~2h，37℃恒定溫度。

3、檢測波長：485/528nm

4、計算方法：分別計算生育酚和樣品的AUC及Net AUC

抗氧化劑作用下的熒光衰退曲線下面積與無抗氧化劑存在時自由基作用的熒光衰退曲線下面積之差，即熒光熄滅曲線的延遲部分面積Net AUC為抗氧化劑的保護面積（圖中斜線面積）。
抗氧化劑的氧自由基清除能力ORAC值，又稱為抗氧化劑的抗氧化能力指數(shù)，是通過熒光衰退曲線的保護面積與標準抗氧化物質的保護面積相比得出。

由于該方法需要使用熒光強度動力學讀數(shù)，所以我們推薦使用BioTek的FLx800或Synergy機器以上的機器進行檢測，可以為您帶來最便捷的操作體驗。

ORAC檢測工作流程

使用該方法的注意事項：

1，對pH值敏感，應采用緩沖液體系，保持pH在7左右,

2，對溫度有要求，動力學需要控制在37攝氏度。

 相關認證

 目前受大眾引用的食物抗氧化值列表為ORAC-07，出自美國農(nóng)業(yè)部USDA非美國食品藥物管理局FDA

參考文獻：Nature Protocols 2, 867 - 870 (2007)
此篇文章中使用儀器即為Synergy系列

 NO.4 熒光偏振檢測解決方案

 我們上一期介紹了基于吸收光的ELISA檢測方法，這里我們想要推薦的是一種基于偏振光的檢測法——熒光偏振免疫檢測法，這是一種均相檢測法，相對于ELISA而言，無需多次的清洗步驟，主要原理是熒光標記的******在樣品緩沖液中與未熒光標記的******對特異性抗體的競爭性結合，分子質量越大，分子旋轉速度越慢，熒光偏振值越大。特點是靈敏、快速、簡單且成本低。

熒光偏振檢測的原理

 熒光偏振是Perrin于1926年最初提出的一種熒光檢測技術。主要是觀察溶中的熒光分子，偏振光激發(fā)時，將發(fā)射偏振光，由于熒光分子的旋轉，發(fā)射光的水平光強和激發(fā)光的水平光強將會不同。熒光信號的偏振和分子旋轉速度相關，旋轉速度又受溶液的粘度、絕對溫度、分子體積和氣體常數(shù)影響。如果保持粘度、溫度恒定，那么旋轉速度的變化主要取決于分子體積和分子重量。

該方法主要用于檢測真菌******類

黃曲霉******≥ 10ppb
煙曲霉******≥1ppb
嘔吐******≥1ppb

相應認證

1. 獲得美國農(nóng)業(yè)部（USDA）認證
2. 美國谷物檢查、包裝、儲存管理局（GIPSA）的認證檢測方法

應用領域
● 糧食生產(chǎn)貯存、進出口檢疫、乳品、食用油等

這一期我們?yōu)榇蠹耀I上了水產(chǎn)品新鮮度、ORAC檢測以及真菌******測定的微孔板解決方案，其實隨著微孔板檢測技術的發(fā)展，也出現(xiàn)越來越多的針對該領域的新方法，比如針對轉基因食品安全性問題而開發(fā)的ELISA及PCR-ELISA檢測方法等等，如果您對以上我們提到的食品安全檢測感興趣，那就快和我們聯(lián)系吧！