ncRNA研究利器：RNAscope原位雜交技術(shù)

導語

RNAscope是一種新型 RNA原位雜交技術(shù)，基于其獨特的探針設計與背景抑制技術(shù)，并且融合傳統(tǒng)RNA原位雜交技術(shù)與FISH技術(shù)的優(yōu)點，使單個RNA的轉(zhuǎn)錄變得可視化，是目前最精準的RNA檢測技術(shù)。

RNAscope?是一項用于檢測位于完整細胞中目標RNA的定量原位雜交（in situ hybridization , ISH) 的新技術(shù)。該技術(shù)以其能放大特異性信號而非噪音信號的專利探針引物設計方法，代表了RNA原位雜交（ISH）領(lǐng)域一項重大進步。

為了能夠顯著提高RNA原位雜交ISH的信號噪聲比，RNAscope?采用了一項原理已被證實的十分類似于熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）的設計原理。兩個獨立的引物探針 (Z形引物對) 需要隨機與目標序列互補結(jié)合，以實現(xiàn)信號放大。因為兩個獨立引物相互緊挨同時相互互補結(jié)合到一個非目標序列的可能性非常之小，這種設計原理保障了對目標信號的特異性放大。

對于任意一個目標RNA序列，都有一組獨特設計的20對Z形引物探針對只針對該目標序列具有互補雜交特異性，而不會結(jié)合到非目標片段上。

靈敏度：每三對Z形引物對足以實現(xiàn)對于單一RNA分子的檢測。在部分RNA段落不能被有效抵達或者RNA部分降解等情況下，20對Z形引物對的設計保障了足夠強勁的RNA檢測。

特異性：Z形引物對的設計屏蔽了背景噪音。單一的Z形引物探針對于非目標序列的結(jié)合不能夠提供信號放大前體序列結(jié)合所需要的足夠長度，以此防止了對于非特異信號的擴增，保障了特異性。

單分子量級的可視性與定量分析： 此20x20x20x的引物設計與信號放大原理讓單一RNA分子能夠在標準的顯微鏡下以一個點狀信號的方式可視化呈現(xiàn)。

能夠檢測到降解了的RNA： 得益于其相對短小的目標結(jié)合區(qū)域(Z形引物對底端40到50個堿基的長度)，此Z形引物對的設計為檢測到部分降解的RNA提供了保障。

實驗方案可在6.5至8小時內(nèi)完成，時間長短取決于不同的RNAscope?實驗方法。手工染色步驟只需要2至2.5小時的操作時間，更快速的完成檢測實驗。

每個點狀信號代表一個目的RNA分子，可在光學顯微鏡或熒光顯微鏡下觀察。通過RNAscope?SpotStudio?軟件進行手工計算或自動圖像分析，對單個細胞中的信號進行定量分析。

幾乎零本底，圖片相當漂亮！